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인간 프로테옴 확장, 35억 개 MS/MS 스펙트럼 기반 PeptideAtlas 구축

비-HLA 및 HLA 펩타이드 데이터 통합으로 인간 단백질체 지도 정밀도 향상

·4분 읽기
인간 프로테옴 확장, 35억 개 MS/MS 스펙트럼 기반 PeptideAtlas 구축
요약
  • 35억 개의 MS/MS 스펙트럼을 포함하는 인간 비-HLA PeptideAtlas 2023-06 빌드가 구축되었다.
  • MSFragger v.3.7을 활용해 7,264개의 Ribo-seq ORFs를 포함한 정밀한 서열 검색을 수행했다.
  • HLA 펩타이드 빌드는 2억 4,000만 개의 스펙트럼을 포함하며 면역 펩타이드 연구의 기반을 제공한다.

인간 단백질체(Proteome)의 구조와 기능을 규명하기 위한 대규모 데이터베이스 구축이 완료되었다. 이번에 구축된 인간 비-HLA(non-HLA) PeptideAtlas 2023-06 빌드는 295개의 ProteomeXchange 데이터셋(PXDs)을 포함하며, 이를 1,17개의 개별 실험으로 세분화하여 총 35억 개의 MS/MS(질량 분석/질량 분석) 스펙트럼을 확보했다.

단백질체 데이터베이스 구축의 기술적 상세

이번 데이터베이스 구축 과정에서는 정밀한 서열 데이터베이스 검색을 위해 MSFragger(v.3.7) 소프트웨어가 사용되었다. 각 데이터셋의 특성에 맞춰 알킬화(alkylation), 라벨링(labelling), 단편화 유형(fragmentation type), 분석 장비 및 농축 전략(enrichment strategy) 등 다양한 검색 파라미터를 적용했다. 특히 모든 데이터셋은 준-효소적(semi-enzymatic) 설정, 그중에서도 주로 준-트립틱(semi-tryptic) 방식을 사용하여 검색되었다.

검색에 사용된 데이터베이스는 2023년 2월의 THISP 레벨 4 데이터베이스를 기반으로 하며, 여기에는 7,264개의 리보솜 프로파일링(Ribo-seq) 오픈 리딩 프레임(ORFs)과 번역 가능성이 있는 기타 기여 서열들이 포함되어 있다. 변이 분석을 위해 메티오닌 산화(methionine oxidation), 단백질 N-말단 아세틸화(protein N-terminal acetylation), 글루탐산 또는 글루타민으로부터의 펩타이드 N-말단 피로글루탐산(pyro-glutamic acid) 형성, 아스파라긴 및 글루타민의 탈아미드화(deamidation)와 같은 일반적인 인위적 변이(artifactual variable modifications)를 적용했다. 알킬화 변이는 카바미도메틸화된 시스테인(carbamidomethylated cysteine)을 고정 변이로 설정했다.

HLA 펩타이드 데이터의 통합 및 검증

인간 HLA(Human Leukocyte Antigen) 펩타이드 분석을 위한 202MS-11 빌드 역시 구축되었다. 이 빌드는 118개의 HLA 면역 펩타이드 농축 공개 데이터셋(PXDs)을 포함하며, 이를 592개의 개별 실험으로 나누어 분석했다. 해당 데이터셋은 9,776개의 MS 런(runs)에서 추출된 2억 4,000만 개의 MS/MS 스펙트럼을 포함하고 있다. HLA 펩타이드는 트립틱 펩타이드의 전형적인 특징인 강한 y-이온(y ions) 대신, 강한 b-이온(b ions)과 내부 단편화 이온(internal fragmentation ions)을 나타내는 경우가 많아 분석 시 주의가 요구된다.

결과에 대한 통계적 검증은 Trans-Proteomic Pipeline(TPP) v.7.0의 PeptideProphet, iPropiment, PTMProphet 도구를 통해 수행되었다. 검증된 결과는 알려진 변이를 고려하여 ProteoMapper를 통해 인간 프로테옴에 매핑되었으며, ENSEMBL 툴킷을 사용하여 게놈(genome)에 매핑되었다. 구축된 데이터셋의 전체 목록과 검색 결과 요약은 PeptideAtlas 온라인 플랫폼을 통해 확인할 수 있다.

데이터 구축 요약

구분비-HLA(non-HLA) 빌드 (2023-06)HLA 빌드 (2023-11)
데이터셋 수295 PXDs118 PXDs
실험 단위 수1,172개 실험592개 실험
MS/MS 스펙트럼 수35억 개2억 4,000만 개
주요 특징준-트립틱(semi-tryptic) 검색 적용HLA 면역 펩타이드 농축 데이터 중심

이번 구축 작업은 인간 단백질체의 구성 요소를 더욱 정밀하게 파악할 수 있는 기반을 마련했다. 구축된 데이터베이스의 상세 수치는 Supplementary Table 15와 16에 명시되어 있으며, 이는 FDR(False Discovery Rate) 지표와 함께 제공된다.

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